Labolatorium Hodowli in Vitro

Dzięki zastosowaniu modeli in vitro możliwe jest zastosowanie polityki 3R (replacement, refirement, reduction) ograniczającej cierpienie i ilość używanych w badaniach zwierząt, stosowanie stosunkowo niewielkich ilości badanych substancji oraz uzyskanie niezbędnej do opracowania statystycznego ilości prób. Przekłada się to na znaczną redukcję kosztów. Użycie modeli in vitro spełnia wymagania większości międzynarodowych norm.

Laboratorium hodowli tkankowych Zawamed klasyfikowane jest jako BSL-2. Na wyposażeniu znajdują się m. in. w komory laminarne typu A2, inkubator CO2 z pełną kontrolą wilgotności, czytnik płytek (pomiar absorbancji, fluorescencji, chemiluminescencji i widma UV-VIS), komory Franza, mikroskopy odwrócony i prosty z możliwością rejestracji obrazu i wykonywania pomiarów morfometrycznych, wirówki z kontrolą temperatury, oraz 12-klorowy cytometr przepływowy BD FACSLyric. Pracownicy laboratorium mają bogate doświadczenie w prowadzeniu prac z użyciem hodowli komórkowych, w tym z materiałem zakaźnym dla człowieka klasyfikowanym jako BSL-2. Laboratorium dysponuje również chłodziarko-zamrażarkami z monitoringiem temperatury, zamrażarką niskotemperaturową (-80°C) z systemem backup i systemem monitorowania temperatury oraz bankiem komórek (pary azotu).

Laboratorium wykonuje testy z wykorzystaniem hodowli komórkowych zwierzęcych i ludzkich. Wśród prowadzonych hodowli znajdują się mono- i ko-kultury, jak i hodowle przestrzenne.

Testy OECD

OECD nr 442E (badanie aktywacji ludzkiej linii monocytarnej) powala bez użycia modeli zwierzęcych określić potencjał uczulający ocenianej substancji w kontakcie ze skórą (zgodnie z Globalnie Zharmonizowanym Systemem Klasyfikacji i Oznakowania Substancji).

Zmodyfikowany test OECD nr 428 (badanie przepuszczalności skóry) powala bez użycia modeli zwierzęcych (ex vivo lub z użyciem hodowli 3D) określić przenikalność badanych substancji do krwioobiegu. Dzięki badaniu możliwe jest wykluczenie błędnej klasyfikacji wyrobu medycznego lub określenie bezpieczeństwa kosmetyku.

OECD nr 432 (badanie fototoksyczności badanej substancji) pozwala na modelu in vitro określić właściwości fotouczulające ocenianej substancji.

Testy według ISO

ISO 10993-5 i ISO 10993-22 dotyczą badania toksyczności wyrobów medycznych oraz stosowanych w wyrobach  nanomateriałów. Laboratorium wykonuje testy wychwytu czerwieni obojętnej (NRU), MTT (redukcja tetrazolium), BrDU (inkorporacja bromodeoksyurydyny) oraz Alamar Blue (redukcja resazuryny).

Istnieje możliwość wykonania testów zgodnie z wytycznymi klienta. Mamy doświadczenie i ustalone metody m. in. w:

  • scratch assay (badanie morfometryczne) – pozwala na pośrednie określenie wpływu badanych substancji na tempo zarastania rany,
  • test migracji (badanie kolorymetryczne) – badanie właściwości chemotaktycznych substancji i wyciągów oraz pośrednio określenie potencjału przeciw- lub pro-zapalnego
  • badanie poziomu reaktywnych form tlenu (ROS) (badanie cytometryczne) – pozwala na określenie potencjału przeciwoksydacyjnego lub prozapalnego (działanie pirogenne)
  • badanie potencjału mitochondrialnego za pomocą JC-1 (badanie cytometryczne) – pozwala na określenie potencjału toksycznego i wyznaczenie TC50 (LD50)
  • badanie apoptoza/nekroza (badanie cytometryczne) – dzięki oznaczeniu odsetka komórek nekrotycznych możliwe jest wnioskowanie o potencjale toksycznym i prozapalnym badanych substancji i gotowych wyrobów. Oznaczenie apoptoza/nekroza pozwala wyznaczyć TC50 (LD50) badanych związków, wyciągów, gotowych wyrobów i wyznaczyć bezpieczne parametry powłoki,
  • fagotest (fagoburst) (badanie cytometryczne) – pozwala na określenie aktywności fagocytarnej stymulowanych komórek żernych (fagocytów – makrofagów, komórek dendrytycznych),
  • MTT (XTT) (badanie kolorymetryczne) – banie poszwala na wyznaczenie TC50, dzięki czemu możliwe jest odpowiednie dobranie dawki substancji czynnych lub dobranie parametrów powłoki,
  • wychwyt czerwieni obojętnej (NR),
  • określenie poziomu uwolnionego LDH – kolorymetria,
  • banie poziomu wydzielanych cytokin – kolorymetria,
  • oznaczenia wybranych markerów aktywacji komórek – cytometria przepływowa.

    Panele skórne

    Skóra jest największym narządem ludzkiego organizmu. Stanowi barierę chroniącą przed czynnikami fizycznymi (temperatura, promieniowanie UV), chemicznymi (zanieczyszczenie środowiska) oraz biologicznymi (bakterie, wirusy i grzyby). Skóra stanowi również przed utratą wody z organizmu. Jej właściwe funkcjonowanie jest kluczowe dla utrzymania zdrowia.

    Badanie funkcji barierowej

    Funkcję bariery wodnej zapewnia przede wszystkim półprzepuszczalna warstwa rogowa naskórka i warstwa lipidowa. Ścisłe połączenia międzykomórkowe komórek skóry tworzą skuteczną barierę fizyczną. W przypadku przerwania ciągłości tej bariery wyzwalane są liczne czynniki immunomodulujące by w konsekwencji utworzyć wtórną linię obrony.

    Penetracja naskórka – analiza pozwala na wykazanie wpływu składników pomocniczych na infiltrację składników aktywnych kosmetyku lub wyrobu medycznego.    

    Badanie aktywacji keratynocytów – dzięki tej analizie możliwe jest wykazanie bezpieczeństwa stosowania substancji czynnych, wyciągów, substancji pomocniczych lub gotowych postaci produktów.

    Model ostrego zapalenia skóry

    Ostre zapalenie skóry jest odpowiedzią układu odpornościowego wyzwalaną przez szereg czynników. Stan zapalny może być konsekwencją zakażenia, poparzenia słonecznego, kontaktu z alergenem lub substancją drażniącą. W celu zbadania właściwości przeciwzapalnych posiadamy modele in vitro indukowanego stanu zapalnego (model UV, stymulacja TNF-a, LPS, PMA, MALP-2). Dzięki badaniom na modelu ostrego zapalenia skóry będą Państwo w stanie wykazać przeciwzapalne lub ochronne działanie oczyszczonej substancji, ekstraktu lub gotowego produktu.

    Model lipogenezy skóry właściwej

    Model lipogenezy pozwala na badanie właściwości przeciwcelulitowych testowanych substancji, wyciągów i gotowych produktów. Test na drodze precyzyjnego pomiaru fluorescencji pozwala wykazać właściwości hamujące na lipogenezę w  fibroblastach obecnych w skórze właściwej.

    Oferujemy badania z użyciem dobrze zdefiniowanych modeli skóry, zarówno hodowanych technikami in vitro (warstwa pojedynczych komórek lub model 3D), jak i ex vivo (tkanki pochodzenia zwierzęcego i ludzkiego).

    Nasz doświadczony zespół badawczy może również opracować model pod specyficzne wymagania klienta.

    +48 577 545 452

    biuro@zawamed.pl

    Ostrów Mazowiecka

    ul. Trzeciego Maja 100 07-300 Ostrów Mazowiecka